Реагенты для подготовки NGS-библиотек

• Реагенты для контроля качества библиотек
• Реагенты для подготовки библиотек Illumina
• Реагенты для подготовки библиотек MGI
• Реагенты для фрагментации НК

NGS состоит из четырех этапов: предварительная обработка образцов, подготовка библиотеки, секвенирование и биоинформатическая обработка данных. Подготовка библиотеки является важным этапом, независимо от выбранного метода секвенирования.
Библиотеки секвенирования представляют собой набор фрагментов ДНК или РНК, отобранных по длине, с присоединенными к ним последовательностями - адаптерами. Процесс подготовки NGS-библиотек разделяют на несколько этапов.

1. Фрагментация

Фрагментацию длинных молекул ДНК до подходящего размера проводят с помощью физических или ферментативных методов. Ферментативные методы обычно предполагают применение эндонуклеаз рестрикции.

- Реагенты для фрагментации РНК

- Реагенты для фрагментации ДНК

2. Отбор фрагментов ДНК и РНК по длине

Отбор фрагментов ДНК и РНК по длине (size selection) — это критический этап подготовки библиотек перед секвенированием, от которого зависит точность и эффективность прочтения.

Неэффективное определение размера может привести к секвенированию низкомолекулярного материала, такого как праймерные димеры, и ухудшению качества данных. 

- Реагенты для отбора фрагментов РНК и ДНК по длине для Illumina

- Реагенты для отбора фрагментов РНК и ДНК по длине для MGI

3. Лигирование адаптеров и циклизация молекул ДНК (для MGI)

К фрагментам необходимо лигировать адаптеры — технические последовательности, которые делают возможными манипуляции с молекулами ДНК. Перед этим проводят восстановление концов двунитевых молекул, чтобы на них не было однонитевых участков, фосфорилирование 5’-концов и аденилирование 3’-концов. Адаптеры обеспечивают прикрепление молекулы к поверхности твердой фазы, клональную амплификацию фрагмента и протекание реакции секвенирования.

Для работы на приборах MGI требуется циркуляризация NGS-библиотеки — из линейных фрагментов создаются кольцевые

- Наборы для лигирования адаптеров Illumina

- Наборы для баркодирования MGI

- Реагенты для циклизации молекул ДНК

4. Оценка качества библиотек

- Реагенты для контроля качества библиотек