ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  ПЦР-лаборатория
  Общая информация о методе ПЦР
  Оборудование для ПЦР
  · ПЦР в классическом формате
  · ПЦР в реальном времени
  · ПЦР в модификации FLASH
  · HLA-генотипирование
  Реагенты для ПЦР
  Расходные материалы, лабораторная
  посуда, лабораторный пластик
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Стволовые клетки (Stem Cells)
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 
/ Каталог / Молекулярная диагностика / ПЦР (Полимеразная цепная реакция) / Оборудование для ПЦР

ПЦР в реальном времени

В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ, Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов полимеразной цепной реакции, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. Этот метод не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории. Благодаря экономии производственных площадей, уменьшению количества персонала и востребованности количественного определения ДНК/РНК этот метод в последние годы успешно применяется в крупнейших санитарно-эпидемических, диагностических и научно-исследовательских центрах развитых стран мира, замещая ПЦР в ее сегодняшнем («классическом») формате.

ПЦР в реальном времениСуществует два основных подхода к детекции результатов ПЦР в реальном времени: с помощью интеркалирующих красителей и на основе флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов.

Низкоспецифичная детекция результатов ПЦР-РВ с помощью интеркалирующих красителей

Детекция продуктов амплификации возможна за счет увеличения флуоресценции интеркалирующего красителя при образовании комплекса с двуцепочечной ДНК. Самый популярный краситель на сегодняшний день - SYBR Green I. Это чувствительный флуоресцентный индикатор двухцепочечной ДНК. Максимум флуоресценции в комплексе с ДНК составляет 521 нм, максимум возбуждения - 497 нм (второй максимум около 254 нм). Хорошо возбуждается стандартным 488-нм лазером. Квантовый выход флуоресценции - около 0.8 (что в 5 раз превышает квантовый выход комплекса этидий-ДНК).

Реже применяются красители EVA Green, LCGreen, Cyto9. Низкая специфичность детекции результатов ПЦР-РВ при использовании интеркалирующих красителей обусловлена тем, что флуореценция раствора вызывается накоплением любой двуцепочечной ДНК в реакционной смеси, в том числе и неспецифической! Следовательно, остается вероятность регистрации ложноположительного результата.

Как работает ПЦР в реальном времени c использованием специфичных зондов?


Более высокой специфичности детекции результатов ПЦР в режиме реального времени можно достигнуть за счет наличия в реакционной смеси дополнительного олигонуклеотида - гибридизационного зонда. Такой зонд "отжигается" (комплементарно соединяется с ДНК) на участке ампликона меджу прямым и обратным праймером. На разных концах зонда расположены флуорофор и тушитель флуоресценции этого красителя. Когда флуорофор и тушитель связаны с олигонуклеотидным зондом, наблюдается лишь незначительная флуоресцентная эмиссия. Во время процесса амплификации за счет 5`-экзонуклеазной активности Taq-полимеразы флуоресцентная метка переходит в раствор, освобождаясь от соседства с тушителем и генерирует флуоресцентный сигнал, усиливающийся в реальном времени пропорционально накоплению амплификата.

SYBR Green IТаким образом, в случае если используемые праймеры "отожгутся" на неспецифических участках с образованием в ходе ПЦР-РВ "нецелевого" продукта, то его последовательность не будет иметь участок, комплементарный гибридизационному зонду и, соответственно, "нецелевые" ампликоны не будут регистрироваться как целевые. При этом для такого варианта ПЦР-РВ можно одновременно использовать несколько видов красителей и гасителей их флуоресценции (с неперекрывающими спектрами излучения). Это позволяет осуществлять мультиплексную ПЦР.

 

Оборудование и расходные материалы для ПЦР анализа в реальном времени

Амплификатор в режиме реального времени Mx3005P
Амплификатор в режиме
реального времени Mx3005P
Амплификатор в режиме реального времени Mx3000P
Амплификатор в режиме
реального времени Mx3000P
TOptical
Амплификатор в режиме
реального времени TOptical
Термоциклер для ПЦР в реальном времени PikoReal
Термоциклер для ПЦР
в реальном времени PikoReal
Applied Biosystems 7500
Система ПЦР в реальном
времени Applied Biosystems 7500 

Амплификатор в режиме
реального времени АНК-32-М
 
Экспресс-амплификатор
в режиме реального времени АНК-4

Реагенты для ПЦР
KingFisher
Системы для выделения
и очистки нуклеиновых кислот

Лабораторный пластик и посуда

Автоматические пипетки
Центрифуги и вортексы
Центрифуги и вортексы
Амплификатор для ПЦР в реальном времени Smart Cycler II
Амплификатор для ПЦР
в реальном времени
Smart Cycler II

ПЦР боксы для стерильных работ

Термоблоки

 

 
Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72, факс: +7 (495) 461-67-63