ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Стволовые клетки (Stem Cells)
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 
/ Обзоры и публикации

Прямой метод иммунофлюоресценции

Прямой метод иммунофлюоресценции

Связанные с тканями иммуноглобулины определяют классическим способом прямой иммунофлюоресценции, который осуществляется следующим образом. При взятии биопсии с целью изучения связанного с тканями иммуноглобулина из пораженных или клинически здоровых участков кожи или слизистой оболочки вырезают небольшие кусочки размером 5х5 мм. Ткань биоптата замораживают при низкой температуре (минус 20-60°С). Серийные срезы из замороженной нефиксированной ткани толщиной 5 мкм готовят в криостате (минус 20°С), помещают на предметное стекло, подсушивают в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем срезы промывают в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS) pH 7,0-7,4 в течение 10 мин с целью удаления не связанных с тканями растворимых белков и обрабатывают люминесцирующей сывороткой (метка изотиоцианатом флюоресцеина) против иммуноглобулинов основных классов (G, A, M), С3 компонента комплемента и фибрина в течение 30 мин. Затем вновь промывают PBS в течение 10 мин и заключают под покровное стекло в 60% нейтральный глицерин. С целью предохранения срезов от выгорания в люминесцентном микроскопе в глицерин добавляют пара-фенилендиамин. Для контроля одновременно проводят изучение криостатных срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, в световом микроскопе.

Связанные с тканями иммуноглобулины и иммунные комплексы, определяемые прямым методом иммунофлюоресценции, обнаруживаются как в участках пораженной кожи, так и в отдаленных ее участках, что свидетельствует о распространенности процесса. Однако необходимо отметить, что в участках с наличием видимых нарушений структуры кожи или слизистой оболочки, т.е. в эпицентре поражений нередко обнаруживают лишь следы фиксированного иммуноглобулина. Это является весомым аргументом для использования биоптатов тканей только клинически непораженной кожи - как удаленных, так и из соседних с поражением участков. Кроме того, с учетом системного поражения и способности кожи элиминировать иммунные комплексы из организма, в случаях локального поражения только в слизистых оболочках полости рта, носа или гениталий, т.е. в местах недоступных для взятия биопсии, могут быть использованы здоровые на вид участки кожи больных. Таким путем удается выявить наличие у больного синдрома иммунных комплексов.

   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72