ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Клеточные технологии и
  Стволовые клетки (Stem Cells)  
  Общая информация
  Выделение стволовых клеток:
  · Сортер клеток MoFlo  
  · Опыт применения  
  Тестирование стволовых клеток:
  · Бак. Анализ на стерильность  
  · Вирусная и бактериальная диагностика  
  · HLA - генотипирование  
  · Проточная цитометрия  
  · Типирование эритроцитов пуповинной     крови (cord blood) 
  · Флуоресцентная микроскопия  
  Реагенты для культивирования,   анализа и дифференцировки   стволовых клеток:
  · Производства Dako  
  · Рекомбинантные белки (Prospec) 
  Оборудование для культивирования   стволовых клеток:
  · Роботизированный комплекс HAMILTON 
  · Innovatis Cellscreen 
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 

Исследование жизнеспособности и функциональной активности клеток при высокоскоростной сортировке на сортере MoFlo

Введение

Непрерывная сортировка клеток при скорости свыше 50000 событий в секунду превращается в рутинную процедуру, если использовать высокопроизводительный сортер клеток MoFlo. Этот мощный прибор позволяет ученым, занимающимся фундаментальными и клиническими исследованиями, ставить эксперименты, которые невозможно реализовать на других сортерах из-за их низкой скорости и необходимости вести сортировку в течение чрезвычайно длительного времени. При работе на MoFlo к характеристикам качества высокопроизводительной сортировки относят, помимо чистоты и выхода популяции, жизнеспособность и функциональную активность клеток.

Приложения высокоскоростной сортировки

Высокоскоростная сортировка позволяет решать ряд практических задач; особенно связанных с выделением редких объектов, например специфических клеточных популяций. Ранее ученые пытались решать эти задачи, пользуясь проточными цитометрами в сочетании с другими технологиями выделения (сепарация с помощью магнитных частиц, проточная элютриация, разделение в градиентах плотности, комплемент-опосредованный лизис контаминирующих клеток и т.д.). Однако, использование этих технологий требует больших затрат времени и дополнительных манипуляций с клетками, которые могут отрицательно сказаться на функции клеток или вызвать их активацию. Высокоскоростная сортировка позволяет осуществлять одностадийную очистку, после чего нужная популяция (>99% чистоты) в кратчайшие сроки непосредственно переносится в культуру или пересаживается реципиенту.

Использование MoFlo позволяет работать с несколькими популяциями клеток, выбрав соответствующие параметры, и одновременно собирать популяции (даже чрезвычайно редкие) в четыре отдельных термостатируемых приемника. Патентованная электроника DakoCytomation обрабатывает события с такой высокой скоростью, что искомая популяция клеток извлекается из первичного образца после однократного прохождения через сортер, без предварительного обогащения. В настоящее время растет интерес к высокоскоростной сортировке стволовых и дендритных клеток, предшественников T-клеток тимуса, а также генетических трансфектантов, частота которых в клеточной популяции менее 0.01%. Пользователь MoFlo может в рутинных условиях выделять популяции редких клеток, затрачивая на это меньше времени, чем требуется для подготовки к работе магнитной колонки.

Дизайн прибора

Основной проблемой высокоскоростной сортировки является совмещение быстрой обработки событий и способности детектировать с высокой чувствительностью даже нечеткую флуоресценцию. Концентрация клеточного образца и работа при высоком давлении (обычно 60 фунтов на квадратный дюйм и выше) позволяют поддерживать диаметр потока, за счет чего осуществляется высокоточное измерение флуоресценции. Более того, высокое давление в сочетании с размерами наконечника определяет частоту стабильного формирования капель. Чем выше этот параметр, тем лучше выход, так как вероятность присутствия нескольких клеток в одной капле снижается. Поэтому число капель, выбраковывающихся из-за совпадения событий, уменьшается. Если сортеры традиционной конструкции обычно генерируют от 10 до 30 тысяч капель в секунду, для MoFlo этот показатель составляет 90-200 тыс.; за счет этого выход клеток любой сортируемой популяции возрастает без ухудшения чистоты сортировки. Чтобы перемещать клетки с такой высокой скоростью без возникновения турбулентности потока и потери ими жизнеспособности (или изменения их функциональных свойств), необходима особая гидравлическая система.

гематопоэтические стволовые клетки

Высокие эксплуатационные качества

В сортере MoFlo используются наконечники запатентованной конструкции, с помощью которых уменьшается турбулентность и сводятся к минимуму воздействия ускорений на каждый тип сортируемых клеток. Валидации данной конструкции посвящено большое число публикаций. В настоящее время MoFlo рутинно используется учеными многих стран мира для идентификации и сортировки широкого спектра клеток, в том числе T клеток, B клеток, NK клеток, гематопоэтических клеток (рис. 1) и нервных стволовых клеток. После сортировки все эти клетки полностью сохраняют свои функции (продукция цитокинов, презентация антигенов, синтез антител, активация, связывание с клетками мишенями, приживление в организме реципиента после трансплантации, длительный рост в культуре).

   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72