Детекция микробных клеток
Отличия флюоресценции микробных клеток от фоновой:
- Отношение интенсивности красного излучения к зелёному: кр/зел
- Форма светового сигнала от времени детекции
|
Флюоресценция микробной клетки:
кр/зел < 1, пик острый |
 |
Фоновая и иная нецелевая флюоресценция:
кр/зел > 1, пик размытый |
Обнаружение окрашенных микробных клеток производится по испускаемой ими под действием лазерного луча флюоресценции, которую регистрируют специальные детекторы.
Флюоресценция всегда имеет большую длину волны, чем вызвавшее её излучение, что позволяет однозначно отличать испускаемый клетками свет от света первичного источника. Однако необходимо также различить свечение клеток от фоновой люминесценции, артефактов и прочих шумов. Как это делается? Спектр излучения флюорохрома вы можете видеть на рисунке. Для детекции флюоресцентного сигнала были выбраны две полосы: зелёная и красная, для каждой из которых существует свой детектор. Интенсивность сигналов, принимаемых каждым из детекторов, регистрируется во времени. И различают целевую и фоновую люминесценцию по отношению интенсивности красного излучения к зелёному и по форме детектируемого светового сигнала.
Разновидности флюоцитометрии
Однако чтобы флюоресцентный сигнал был испущен и сдетектирован, необходимо, чтобы искомая клетка каким-то образом попала из глубины объёма образца под излучение лазера вблизи детекторов. Подобную "сортировку образца" осуществляют двумя способами, давшими название разновидностям технологии.
В первом случае образец после очень тщательной гомогенизации и перевода в жидкое состояние непрерывно пропускают в виде ламинарного потока через тончайший капилляр измерительной ячейки, вокруг которого расположены лазер и два детектора - для приёма "красной" и "зелёной" флюоресценции. Такой вариант цитометрии называют проточной.
Во втором случае клетки сначала иммобилизуют на твёрдой поверхности - мембранном фильтре, в процессе фильтрации через него исследуемого объёма образца. Затем проводят окрашивание, и, наконец, поверхность фильтра, помещенного в измерительную ячейку, сканирует лазерный луч. В моменты, когда лазерный луч падает на окрашенную флюорохромами микробную клетку, испускаемую ею флюоресценцию регистрируют детекторы. Такой вариант называется твёрдофазной цитометрией.
Информация для заказа
|
