TOS пропионатный агар (основа)

Среда для подсчета бифидобактерий в молочных продуктах

Селективная среда TOS пропионатный агар в сочетании с селективной добавкой мупироцина лития (MUP) позволяет определять количество бифидобактерий в стартовых культурах и различных молочных продуктах таких, как ферментированное и неферментированное молоко, сухое молоко и детское питание. Рост других молочнокислых бактерий в значительной степени ингибируется, таким образом, нет необходимости подтверждать выросшие колонии бифидобактерий. Определение  бифидобактерий выполняется методом посева и подсчета на чашках Петри, которые инкубируются в анаэробных условиях при температуре 37^оС. Состав среды полностью соответствует рекомендациям ИСО 29981/IDF 220:2010.

Принцип действия

Бифидобактерии – это грамположительные неспорообразующие анаэробные палочки. Комбинация пептона из казеина и дрожжевого экстракта является богатой питательной основой для отличного роста бифидобактерий. Добавленный в среду сульфат магния восстанавливает поврежденные клетки бифидобактерий. Сульфат аммония является источником азота, дигидрофосфат калия и гидрофосфат калия поддерживают буферность среды на уровне нейтрального значения рН. L-цистеин служит восстанавливающим агентом и поддерживает необходимые анаэробные условия в среде.

Галактоолигосахарид TOS является специфическим ростовым фактором для всех бифидобактерий, тогда как другие молочнокислые бактерии не могут утилизировать данный олигосахарид. В комбинации с пропионатом натрия, который в значительной степени ингибирует рост сопутствующей микрофлоры, TOS пропионатный агар является высокоселективной средой для выделения бифидобактерий.

Мупироцин лития ингибирует рост лактобацилл, лактококков, стрептококков и лейконостока, не влияя на рост бифидобактерий. Типичная микрофлора молока ингибируется мупироцином лития. Среда на основе TOS пропионатного агара и мупироцина лития является настолько селективной, что позволяет определять бифидобактерии без необходимости дальнейшего подтверждения.

Состав среды (г/л)

Пептон из казеина - 10,0; дрожжевой экстракт - 1,0; KH₂PO₄ - 3,0; K₂HPO₄ - 4,8; (NH₄)₂SO₄ - 3,0; MgSO_4*7H₂O – 0,2;  L-цистеин - 0,5; пропионат натрия – 15; галактоолигосахарид TOS – 10; агар-агар – 15,0.

Приготовление среды

TOS Пропионатный агар (основа)

Растворить 62,5 г в 950 мл дистиллированной воды и нагреть в кипящей водяной  бане или текучим паром, с частым перемешиванием до полного растворения. Среда чувствительна к нагреванию, ее следует автоклавировать небольшими порциями. Например, 95 мл или 190 мл растворенной среды переносят в соответствующие флаконы и автоклавируют при 115^оС в течение 15 минут. После этого среду быстро охлаждают до 48^оС на водяной бане. После автоклавирования среда становится слегка матовой, однако это проходит при охлаждении до 48^оС на водяной бане. Основа среды остается стабильной в течение 4 часов при нахождении в водяной бане при 48^оС. рН среды: 6,7±0,2 при 25^оС. Приготовленная среда желтоватого цвета, прозрачная.

MUP селективная добавка

Селективная добавка мупирацина лития поставляется в лиофилизированном виде (Кат.N1.00045.0010). Каждый флакончик содержит 25 мг мупирацина лития, рассчитанный на 500 мл TOS-MUP среды. Для приготовления селективной добавки необходимо добавить к флакончику 25 мл стерильной дистиллированной воды. Мягко перемешать до полного растворения осадка.

TOS-MUP агар

Внести в асептичных условиях 5 мл MUP селективной добавки к 95 мл основы среды (к 190 мл основы среды следует добавить 10 мл MUP селективной добавки). Среда находится в расплавленном виде на водяной бане при температуре 48^оС. При внесении селективной добавки следует избегать образования воздушных пузырьков в среде, которые могут вызвать окисление среды. TOS-MUP агар содержит 50 мг/л мупирацина лития. После добавления мупирацина лития среду необходимо сразу же использовать.

Подготовка образца

Образцы для исследований готовят в соответствии с международными стандартами ИСО 8216/IDF122 (сухие молочные продукты) или ИСО 7889/IDF117 (йогурты). Каждый образец 10 г суспендируется в 90 мл разбавляющего раствора (0,25% концентрация раствора Рингера). Готовится серия десятикратных разведений на основе 0,25% раствора Рингера, температура раствора составляет 20^оС. Следует избегать образования пузырьков воздуха при перемешивании, поскольку бифидобактерии погибают при контакте с кислородом воздуха. Для того, чтобы существенно снизить риск повреждения клеток бифидобактерий, время с момента приготовления первого разведения и до посева в агар не должно превышать 15 минут.

Метод посева в агар

Посев образца на среду TOS-MUP агар осуществляют методом глубинного посева. Для этого 1 мл образца или его десятикратного разведения переносят в пустую чашку Петри и смешивают с 15 мл среды, охлажденной до 48^оС. При добавлении образца и среды стараются избегать захват пузырьков воздуха средой.

Инкубация

Сразу после затвердевания агара чашки переворачивают и инкубируют в анаэробных условиях (анаэростат Anaerojar в комплекте с газогенерирующими пакетами Anaerocult^®-A для создания анаэробных условий) в течение 72±3 часов при температуре 37^оС. Анаэробные условия следует контролировать, используя соответствующие индикаторы анаэробных условий (Anaerotest^®).

Подсчет колоний

Все чашки до 300 колоний подсчитываются. Бифидобактерии растут на чашках в виде белых колоний с запахом уксусной кислоты. Морфология колоний может сильно различаться от чечевицеобразных до круглых колоний в агаре и от звездоподобных  до клевероподобных колоний на поверхности агара. Диаметр колоний составляет 1-4 мм.

Подтверждение колоний

Для подтверждения выросших колоний необходимо провести микроскопию. Бифидобактерии – это палочки неправильной формы, которые видны при х1000 кратном увеличении в фазово-контрастном микроскопе. Альтернативно можно также поставить фруктозо-6-фосфат фосфокетолазный тест с выросшими характерными колониями.

Результаты

Подсчитывают количество колоний бифидобактерий (белые колонии с запахом уксусной кислоты), выросших на TOS-MUP агаре, умножают на степень разведения образца и получают количество бифидобактерий в 1 г образца.

Хранение

Сухая питательная среда храниться при температуре от +15 до +25^оС в сухом месте, в плотно закрытой упаковке и может использоваться до срока хранения, указанного на упаковке. Приготовленная основа среды стабильна в течение 3 месяцев при хранении от +2 до +8^оС при хранении во флаконе (защищена от высыхания) и в темном месте. Селективная добавка после добавления воды стабильна в течение 2 недель при хранении в холодильнике  +2 до +8^оС и в течение 3 месяцев при хранении при -20^оС.

Информация для заказа

Область использования: Реагенты Merck	Производство:	Merck
	Метод:
	Объем:	500 г.
	Кат. номер:	1.00043.0500
Цена (с НДС 20%):	по запросу	В корзину
Наименование: TOS пропионатный агар (основа). Примечание: