Набор реагентов для определения Витамина D, 25-OH, ИФА
25-OH-Витамин D (Прямой)
Наименование и назначение
Набор 25-ОН Витамин D ИФА предназначен для количественного определения общего 25-ОН Витамин D (Витамин D2 и витамин D3) ИФА в сыворотке (человека).
Витамин D является главным регулятором обмена минеральных веществ в костной ткани. Нижние уровни витамина D у пациентов с острым инфарктом миокарда (ОИМ) и сезонные колебания уровня витамина D обсуждаются.
Витамин D представляет собой стероидный гормон, участвующий в абсорбции кальция в кишечнике и регуляции гомеостаза кальция. Две основные формы витамина D, называемые витамин D3 (холекальциферол) и витамин D2 (эргокальциферол), имеют изомерные структуры, но D2 предположительно менее активен, чем D3 .
Физиологические уровни витамина D3 зависят не только от поступления с пищей, но также могут быть получены из предшественника холестерина, 7-дегидрохолестерина в коже под действием солнечных лучей. D2 поступает из растительных источников и составляет всего 5% от общего количества витамина D в организме. В печени витамин D гидроксилируется до 25-гидроксивитамина D (25-OH D), основного циркулирующего метаболита витамина D. Витамин D и 25-OH D попадают в кровоток связанными с белком связывающим витамин D (VDBP). Небольшая часть 25-OH D дополнительно гидроксилируется в почках с образованием биологически активного гормона 1,25 дигидроксивитамина D (1,25(OH)2 D). Этот процесс жестко регулируется концентрацией 1,25(OH)2 D, паратиреоидного гормона, гипофосфатемией и уровнем ионизированного кальция. Концентрации 1,25(OH)2 примерно в 1000 раз ниже, чем у 25-OH D. Хотя 1,25(OH)2D представляет биологически активную форму витамина D, общепризнанно, что измерение циркулирующего 25 OH D обеспечивает лучшую информацию о статусе витамина D у пациента и позволяет использовать его при диагностике гиповитаминоза.
Концентрация 25-ОН D уменьшается в зимнее время (уменьшение воздействия солнца), при темном цвете кожи и с возрастом.
Определение 25-OH D в сыворотке или плазме полезно в диагностике и терапии при постменопаузальном остеопорозе, рахите у детей, остеомаляции, почечной остеодистрофии, гипокальциемии новорожденных и гиперпаратиреозе. Кроме того, критически обсуждается влияние преобладающего субклинического дефицита витамина D в разных европейских странах.
Интоксикация витамином D происходит главным образом во время приема высоких доз фармацевтических препаратов витамина D и может приводить к гиперкальциемии и нефрокальцинозу у восприимчивых младенцев.
25-ОН Витамин D ИФА - тест для твердофазного иммуноферментного анализа, основанный на принципе конкурентного связывания.
На первом этапе, образцы должны быть предварительно обработаны в отдельных пробирках с денатурирующим буфером для извлечения аналита, так как большая часть циркулирующего 25-ОН Витамина D связана в крови с VDBP (Белок связывающий Витамин D) в естественных условиях. После нейтрализации добавляются биотинилированый 25-ОН витамин D (ферментный конъюгат) и меченый пероксидазой стрептавидин (ферментный комплекс). После аккуратного перемешивания раствор переносится в лунки микропланшета. Эндогенный 25-ОН витамина D из образца конкурирует с биотинилированным 25-OH-витамином D3 за связывание с VDBG, который сорбированн в лунках микропланшета. Связанный 25-ОН витамин D обнаруживается с помощью ферментного комплекса. Для этого проводят инкубацию с последующей стадией промывки для удаления несвязанных компонентов. Цветную реакцию начинают добавлением субстрата фермента и останавливают после определенного времени. Интенсивность окраски обратно пропорциональна концентрации 25-ОН витамина D в образце.
Процедура анализа
Каждая постановка теста должна включать стандартную кривую
Все стандарты, образцы и контроли следует ставить в дублях. Условия для стандартов, образцов и контролей должны быть идентичны.
Пробоподготовка
1.Подготовить необходимое количество рабочего раствора конъюгата (см. п.4.4)
- Закрепить необходимое количество пробирок или лунок (без антител), необходимых для извлечения 25-ОН Витамина D (соответствующие пробирки и стрипы не входят в состав набора).
- Поместить 25 мкл каждого стандарта, контроля и образца в пробирки или лунки микропланшета, используя новые наконечники для дозатора.
- Добавить 50 мкл денатурирующего буфера в каждую пробирку или лунку.
- Закрыть пробирки или лунки фольгой и инкубировать 30 мин при температуре 37 °C.
- Добавить 200 мкл нейтрализующего буфера в каждую пробирку или лунку.
- Внести 100 мкл рабочего раствора конъюгата в каждую пробирку или лунку.
- Тщательно перемешать в течение 10 секунд. Важно добиться полного перемешивания на этом этапе. Для постановки теста использовать 150 мкл смеси.
Процедура ИФА
см. инструкцию к набору
ОЖИДАЕМЫЕ ЗНАЧЕНИЯ
Для каждой лаборатории рекомендуется устанавливать собственные нормальные и ненормальные значения.
В исследовании, проведенном на нормальных здоровых взрослых людях, используя набор DRG ELISA, были получены следующие данные:
|
Обследуемые
|
Кол-во
|
Возраст
(лет)
|
Средний возраст
|
Среднее конц.
(нг/мл)
|
5% Перцентиль
(нг/мл)
|
5% Перцентиль
(нг/мл)
|
|
Всего
|
120
|
21 - 76
|
44
|
23,7
|
8,69
|
51,0
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Мужчины
|
64
|
24 - 76
|
47
|
25,8
|
9,78
|
51,9
|
|
Женщины
|
56
|
21 - 75
|
40
|
21,2
|
7,70
|
41,3
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Европейцы
|
61
|
21 - 75
|
44
|
28,2
|
12,6
|
52,5
|
|
Латиноамериканцы
|
24
|
21 - 76
|
40
|
23,2
|
12,1
|
40,8
|
|
Афроамериканцы
|
35
|
24 - 65
|
45
|
16,1
|
5,95
|
36,5
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Северная часть США
|
40
|
21 - 75
|
43
|
20,3
|
11,8
|
32.3
|
|
Центральная часть США
|
40
|
24 - 62
|
43
|
16,1
|
6,36
|
29,6
|
|
Южная часть США
|
40
|
24 - 76
|
45
|
34,6
|
18,9
|
56,0
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Лето
|
60
|
24 - 76
|
47
|
29,7
|
12,7
|
52,7
|
|
Зима
|
60
|
21 - 66
|
40
|
17,6
|
6,67
|
29,5
|
Образцы были собраны у людей различной расовой принадлежности в трех географических местах (север, центр и юг США) летом и зимой.
Результаты анализа не могут быть единственной причиной терапевтического заключения. Результат должен коррелировать с другими клиническими исследованиями и диагностическими тестами.
В литературе рекомендуют следующую классификацию статуса Витамина Д:
|
Статус Витамина Д
|
25-ОН Витамин Д
(нг/мл)
|
25-ОН Витамин Д (нмоль/л)
|
|
Отсутствие/дефицит
|
<10
|
<25
|
|
Недостаточность
|
10-29
|
25-72,5
|
|
Достаточность
|
30-100
|
75-250
|
|
Токсичность
|
>100
|
>250
|
Информация для заказа
| Область использования: | Производство: | DRG |
| Метод: | ELISA |
| Объем: | 96 тестов |
| Кат. номер: | EIA5396 |
| Цена (с НДС 10%): | по запросу | В корзину  |
Есть на складе в Москве.
Наименование: Набор реагентов для определения Витамина D, 25-OH, ИФА / 25-OH-Витамин D (Прямой).
Примечание: |
