[5 · 2] -32% Редактировать
ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Иммуноферментный анализ  
  Оборудование для ИФА
  · Автоматические ИФА анализаторы
  · Полуавтоматические ИФА анализаторы
  · Полуавтоматические люминометры
  · Промывочные устройства для ИФА
  · Шейкеры для ИФА
  · Механические дозаторы
  Диагностические тест-системы
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Стволовые клетки (Stem Cells)
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 
/ Каталог / Иммунология / Иммуноферментный анализ (ИФА) / ИФА наборы / ИФА наборы для диагностики человека / Метаболизм костной ткани

Остеокальцин (Целая молекула)

1      НАЗНАЧЕНИЕ

Набор используют для измерения остеокальцина (целая молекула)  человека, обезьяны, собаки и быка в сыворотке или гепаринизированной плазме.

Данный набор предназначен только для in vitro диагностики и профессионального использования.

2      Принцип анализа

Тест измеряет только целые молекулы остеокальцина, которые синтезируются остеобластами заново, и не определяет циркулирующиеся фрагменты.  Это сэндвич-анализ с использованием моноклональных антител к  амино- и карбокси-терминальным областям белка. Он распознает только целые молекулы остеокальцина и требует полного  49-осадочного протеина для детекции.

Это быстрый, чувствительный и надежный тест.

3      Литература

1. Gundberg, CM. and R.S. Weinstein. Multiple immunoreactive forms of osteocalcin in uremic serum.

J.Clin.Invest. 77:1762-67, 1986.

2. Power, M.J.; Gosling, J.P. and P.F. Fotrell. Radioimmunoassay of osteocalcin with polyclonal and

monoclonal antibodies. CJinilhfinL 35: 1408-15, 1989.

3. Tracy, R.P.; Andrianorivo, A.; Riggs, B.L. and K.G. Mann. Comparison of monoclonal and polyclonal

antibody-based immunoassays for osteocalcin: a study of sources of variation in assay results. JBMR 5:

451-61, 1990.

4. Garnero, P.; Grimaux, M.; Demiaux, B.; Preaudat, C, Seguin, P. and P.D. Delmas. Measurement of

serum osteocalcin with a human-specific two-site immunoradiometric assay. JBMR 7: 1389-1398, 1992.

5. Calvo, M.S., Eyre.D.R. and Gundberg, CM. Molecular Basis and Clinical Application of Biological

Markers of Bone Turnover. Eodociine Reviews, 17(4):333-368,1996.

6. Bodine, P.V.N., Trailsmith, M., and Komm, B.S., Development and Characterization of a Conditionally

Transformed Adult Human Osteoblastic Cell Line. JBMR, 11(6): 806-819, 1996.

7. Nuttal, M.E., Paton, A.J., Olivera, D.L., Nadeau, D.P. and Gowen, M. Human Trabecular Bone Cells are

able to Express both Osteoblastic and Adipocytic Phenotype: Implications for Osteopenic Disorders. JBMS

13 (3): 371-382 (1998).

4 Реагенты: Описание и подготовка
Все реагенты стабильны при 4 °C в течение 6 месяцев.

1. Буфер для разведения образцов. Флакон 60 мл. хранить при 4 °C, стабилен в течение 6 месяцев.

2. Фосфатно-солевой буфер концентрированный (Промывочный буфер).

Флакон 100 мл, разбавить содержимое с 500 мл дистиллированной воды. Хранить при 4 °C, стабилен в течение 6 месяцев.

3. Остеокальцин Стандарты. Пять флаконов, лиофилизированные.

Развести каждый флакон с 0,5 мл дистиллированной воды, (использовать 0,50 мл мерную пипетку), заменить пробки и оставить стоять в течение 5 минут. Смешать каждый флакон и повращать несколько раз, чтобы получился прозрачный раствор.

Храните эти восстановленные стандарты замороженными при температуре -20 ° С.(Стабильны в течение 6 месяцев).

Перед использованием необходимо, чтобы восстановленные стандарты оттаяли и нагрелись до комнатной температуры. Выдерживает 2 цикла заморозки.

4. Антисыворотка, содержащая биотинилированные антитела к остеокальцину человека. 1 флакон, 0,25 мл

Разбавить буфером для разведения образцов достаточное количество антисыворотки для текущего использования  в соответствии с коэффициентом разбавления, указанного на этикетке. Хранить при 4°C. Стабилен в течение 6 месяцев.

5. Нативная антисыворотка остеокальцина человека. Один флакон, 0,5 мл.

Разбавить содержимое с 10 мл буфера для разведения образцов  и использовать немедленно. Разбавление 1:20 . Развести только количество, необходимое для  текущего использования. Хранить при 4°C. Стабилен в течение 6 месяцев.

6. Конъюгат стрептавидин-пероксидазы хрена. Один флакон, 11 мл. Хранить при  4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.

7. Субстрат пероксидазы (3,3',5,5' ТМБ). Один флакон. Хранить при  4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев

8. Стоп-раствор (1M HCl +1M H3PO4) Один флакон, 12 мл. Хранить при  4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.

9. Раствор перекиси водорода Один флакон. Хранить при  4 °C. Стабилен в течение 6 месяцев.

10. Остеокальцин человека. Контроли Два флакона, Добавьте 200 мкл дистиллированной воды в каждый флакон, оставьте на 10 мин при комнатной температуре, аккуратно перемешайте, переворачивая. (Высокий контроль 25 нг/мл и низкий 5 нг/мл).

11 Один 96- луночный планшет (8 стрипов,  легко разделяемых), Покрыт 1-19 моноклональными антителами.

5 Материалы, необходимые для исследования, но не включенные в набор

1. Микроплашечный ридер (450 нм)

2. Микропипетки на 20 и 100 мкл, градуированная пипетка 0,5 мл

3.Устройство для промывки планшента

5. Дистиллированная вода

6      Меры предосторожности

Некоторые компоненты этого набора содержат изотиазолоны (5 ppm) в качестве консерванта.
Стоп-раствор содержит серную кислоту. Избегайте попадания компонентов на кожу и в глаза.

7      Сбор и подготовка проб

Все пробы (сыворотка, плазма, питательные среды, т.д) должны быть собраны и хранится при температуре - 20 °C. Для долговременного хранения (>1 месяца) нужно хранить при  -70 °C. Образцы могут быть замороженны-размороженны не более 2 раз.

Сыворотка и гепаринизированная плазма  - лучшие образцы крови.

Сыворотку собаки можно использовать без разведения или с разведением 1:1.

Используйте разбавитель буфера для разведения образцов.

Бычий остеокальцин (присутствует в бычьей сыворотке) практически идентичен остеокальцину человека.  И он лучше подходит для выращивания клеток в питательной среде, образцы надосадочной жидкости клеточной культуры, выращиваемой в течение 24-48 часов,  годятся в качестве образцов.

8      Процедура анализа

Все реагенты должны быть комнатной температуры.

1.Пожалуйста, посмотрите пункт подготовки реагентов. Все реагенты должны быть комнатной температуры.

2. Выньте планшет из запечатанного пакета. Неиспользуемые стрипы сразу должны быть убраны из держателя и запечатаны в пакете для будущего использования.

3.Добавьте 25 мкл разбавителя буфера (нулевая лунка или пустая лунка), стандартов, образцов и контролей в соответствующие лунки, затем 50 мкл антисыворотки.

Планшет должен быть заполнен в течение 15 мин или быстрее. Аккуратно вращайте планшет около 1 минуты. Плотно закройте и инкубируйте  1 час при комнатной температуре.

4. Добавьте 50 мкл разведенной антисыворотки, содержащей биотинилированные антитела, во все лунки.  Повращайте планшет около 1 минуты. Плотно закройте и инкубируйте  1 час при комнатной температуре.

5. Резко вытряхните содержимое лунок и промойте пластины 3 раза с 0,3 мл фосфатно-солевого промывочного буфера. Добавьте 100 мкл конъюгата во все лунки.

Перемешайте и потом инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут.

6. Перемешайте один объем раствора ТМБ субстрата с одним объемом раствора перекиси водорода и отложите. (Смешайте только количество, необходимое для используемых лунок в данной постановке).

Промойте также как в 4 пункте. Немедленно добавьте 100 мкл субстрата во все лунки,

инкубируйте в темноте, при комнатной температуре 10 минут.

7. Добавьте 100 мкл стоп-раствора во все лунки, перемешайте и сразу измерьте ОП при 450 нм. Запишите данные.

Примечание:

Добавляйте стоп-раствор в том же порядке, как и субстрат.

Перед началом измерений ОП, убедитесь, что на поверхности нет пузырьков воздуха, дно лунки  чистое и сухое.

Используйте новые пластиковые насадки для дозатора для каждого стандарта, контроля и образца для предотвращения контаминации. Берите образцы и стандарты на дне лунок,  реагенты -  возле поверхности. Не трясите  сильно планшет, чтобы капли жидкости не вылетали из лунок.

9      Подсчет результатов
  1. Подсчитайте средние величины абсорбции для каждого набора референс-стандартов, контролей и проб пациентов.
  2. Постройте стандартную кривую построением на оси координат: средняя величина абсорбции, полученная от каждого референс-стандарта против его концентрации в нг/млс величиной абсорбции на вертикальной оси(Y) и концентраци на горизонтальной оси(X).
  3. Используя среднюю величину абсорбции для каждого образца, определите соответствующую концентрацию остеокальцина .

 

Всегда  создавайте стандартную калибровочную кривую для каждого нового анализа.

10    Типичные характеристики

(Примечание: не может использоваться для вычисления неизвестных)

 

Стандарт (нг/мл)

A 450нм

Среднее -Бланк

0,00

(пустые лунки)

 

0,149

 

 0,00

0,146

0,147

 1,00

0,294

 

 1,00

0.320

0,160

 5,00

0,745

 

 5,00

0,850

0,605

10,00

1,051

 

10,00

1,031

0,894

25,00

1,242

 

25,00

1,286

1,117

50,00

1,409

 

50,00

1,393

1,254

 

Типичная калибровочная кривая

Остеокальцин человека (целая формула)

(Только пример, не может использоваться для вычисления неизвестных)

 

инструкция PDF

Информация для заказа:

Область использования:Производство:DRG
Метод:ELISA 
Объем:96 
Кат. номер:EIA1735
Цена (с НДС 10%):1381.88 USDВ корзину
Остеокальцин (Целая молекула)Наименование: Остеокальцин (Целая молекула).
Примечание:
   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72