ИФА наборы для диагностики патогенов растений

• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Agdia
• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Bioreba
• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Nano Diagnostics
• ИФА наборы для диагностики патогенов растений Puda Scientific

ИФА (иммуноферментный анализ) наборы — это один из основ современной лабораторной диагностики фитопатогенов. Они позволяют быстро, специфично и относительно недорого обнаруживать вирусы, бактерии, фитоплазмы и иногда грибы в растениях.

Принцип работы

Метод основан на реакции «антиген-антитело».

Антиген — это целевой патоген (или его часть, например, белок оболочки вируса). Антитело — это специфический белок, который связывается с этим антигеном.

Прямой ИФА: Антитело, меченное ферментом, связывается напрямую с антигеном.

Двойной сэндвич ИФА (DAS-ELISA): Наиболее распространенный формат в фитодиагностике.

Используются два антитела: одно прикреплено к лунке планшета («ловящее»), другое — меченное ферментом («детектирующее»). Патоген (антиген) оказывается «в бутерброде» между ними. После добавления субстрата фермент вызывает изменение цвета, интенсивность которого пропорциональна количеству патогена.

Что можно диагностировать с помощью ИФА?

1. Вирусы растений (основная область применения): Вирус мозаики огурца (CMV), вирус Y картофеля (PVY), вирус A картофеля (PVA), вирус M картофеля (PVM), вирус S картофеля (PVS), вирус X картофеля (PVX), вирус скручивания листьев картофеля (PLRV), вирус кольцевой пятнистости томата (ToRSV), вирус пятнистого увядания (бронзовости) томата (TSWV), вирус шарки сливы (PPV), неповирус кольцевой пятнистости малины (RpRSV), вирус мозаики резухи (ArMV), Вирус стрика табака (TSV) и десятки других.
2. Бактерии: Ralstonia solanacearum (бурая гниль пасленовых), Clavibacter michiganensis (бактериальный рак томата), Xylella fastidiosa (болезнь Пирса).
3. Фитоплазмы и спироплазмы (например, вызывающие позеленение цветков, столбур).
4. Грибы и оомицеты (реже): Phytophthora infestans (фитофтороз), некоторые вироиды. Для грибов метод менее распространен из-за сложности получения специфичных антител.

Преимущества ИФА наборов

Специфичность:  Высокая точность обнаружения конкретного патогена.

Чувствительность:  Могут обнаруживать патоген даже при низкой концентрации и в латентной форме.

Скорость: Результат за 4 часа (включая подготовку образцов).

Высокая пропускная способность: Можно тестировать сотни образцов одновременно.

Относительная простота: Не требуется сложного дорогого оборудования (необходимы планшетный спектрофотометр (ридер), шейкер-инкубатор, вошер, пипетки).

Количественный/полуколичественный результат: По оптической плотности можно судить о концентрации патогена.

Недостатки и ограничения

Не пригоден для абсолютно всех патогенов: Требуется производство высокоспецифичных и качественных антител для каждого целевого организма.

Не всегда обнаруживает новые штаммы: Если штамм мутировал и изменил целевой белок, антитело может его не «узнать».

Не определяет жив/мертв: Может дать положительный результат на инактивированный патоген. Требует базовой лабораторной инфраструктуры.

Менее чувствителен, чем ПЦР: Особенно для патогенов, локализованных только в отдельных тканях.

Ключевые производители и поставщики

1. LOEWE Biochemica (Германия): Один из мировых лидеров, огромный ассортимент наборов для сотен фитопатогенов.
2. BIOREBA (Швейцария): Еще один ведущий производитель, известный высоким качеством антител и комплексными наборами.
3. Adgen/Neogen (США/Великобритания): Широкий спектр наборов для диагностики вирусов и бактерий.
4. Creative Diagnostics (США): Предлагает наборы для многих фитопатогенов.
5. Agdia (США): Американский производитель, который активно развивает линейку ИФА-тестов для важных патогенов (например, вирусов картофеля, бактериальных болезней).
6. Nano Diagnostics (США): Предлагает наборы для многих фитопатогенов (например, врусов вишни, сливы, малины)
7. СИББИОЛАБ (Россия): Разрабатывает и производит тест-системы для сельского хозяйства.

Типичный состав набора

Микротитровальный планшет (96 лунок) с иммобилизованными антителами.

Контрольные образцы (положительный и отрицательный).

Конъюгат (антитела с ферментом).

Буферы для экстракции, разведения, отмывки.

Хромогенный субстрат (чаще всего TMB, который дает синее окрашивание).

Стоп-раствор (обычно кислота, меняет цвет на желтый).

Процедура тестирования (упрощенно)

1. Подготовка образца: Измельчение листовой ткани в экстракционном буфере.
2. Внесение образца: В лунки планшета вносятся контрольные и исследуемые образцы.
3. Инкубация: Патоген (если есть) связывается с антителами на планшете.
4. Отмывка: Удаление несвязавшихся веществ.
5. Внесение конъюгата: Добавление меченых антител.
6. Повторная инкубация и отмывка.
7. Внесение субстрата: Фермент вызывает изменение цвета.
8. Остановка реакции и считывание: Измерение оптической плотности на ридере.

Области применения

Сертификация безвирусного посадочного материала (семенной картофель, саженцы плодовых и ягодных культур, декоративные растения).

Мониторинг фитосанитарного состояния полей и теплиц.

Эпидемиологический контроль (отслеживание распространения болезней).

Импорт/экспортный контроль (карантинные службы).

Современные тенденции

Комплексные наборы: Позволяют тестировать один образец сразу на несколько патогенов (multiplex).

Быстрые форматные тесты (иммунохроматографические полоски): На основе тех же антител, но для использования прямо в поле, без оборудования. Результат за 5-15 минут.

Заключение

ИФА-наборы остаются «золотым стандартом» для массовой, рутинной диагностики многих важнейших патогенов растений, особенно вирусов.

Они идеальны для служб карантина растений, семеноводческих компаний и диагностических лабораторий. Для идентификации неизвестных патогенов или при необходимости сверхвысокой чувствительности чаще применяют молекулярные методы (ПЦР, секвенирование), но ИФА не теряет своей актуальности благодаря налаженности, скорости и экономической эффективности.