ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Стволовые клетки (Stem Cells)
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 
/ Обзоры и публикации

Как выбрать правильный вектор экспрессии и использовать его в системе E.coli

Time:2017-08-15 оригинал публикации

В биомедицинских и других направлениях исследований наблюдается растущая потребность в рекомбинантных белках.  Чтобы получить рекомбинантный белок кодирующая протеин последовательность  клонируется в вектор экспрессии и далее трансформируется в клетке-хозяине.  Что же такое вектор экспрессии?  Упрощенно, вектор экспрессии – это молекула ДНК, приносящая специфический ген в клетку-хозяина и использующая систему синтеза белков этой клетки для синтеза закодированного этим специфическим геном белка.  Векторы экспрессии включают экспрессию чужеродных генов в клетке-хозяине на высоком уровне. После нескольких лет развития использование векторов экспрессии стало широко применяемой популярной биотехнологией.

В связи со своей функцией вектор экспрессии может  содержать элементы, необходимые для экспрессии генов.  Хорошо известные  элементы включают в себя нормальный или сильный промоутер, правильную инициирующую трансляционную последовательность, такую как рибосомальный связывающий сайт и инициирующий кодон, терминальный кодон, транскрипционная терминальная последовательность.  Дополнительно, для того чтобы облегчить очищение протеина после его продукции, векторы экспрессии обычно имеют метку очищения, которая добавлена к последовательности интересующего протеина. Наконец, некоторые векторы экспрессии имеют определенные элементы,  имеющие решающее значение для процессов трансформации или трансфекции.

Обычно вектор экспрессии более сложный по сравнению с вектором клонирования -  молекула ДНК, которая несет чужеродную ДНК в клетку-хозяина, внутри клетки реплицирует и продуцирует множество копий гена-мишени.  Векторы клонирования содержат элементы, важные для саморепликации, но не имеют элементов, контролирующих экспрессию белков. В сравнение, векторы экспрессии имеют оба эти элемента.

В настоящее время доступен ряд систем экспрессии белков,  таких как E. coli, дрожжи, клетки насекомых, клетки млекопитающих. Соответственно, существует множество различных векторов экспрессии, которые могут использоваться в различных системах экспрессии.   Наиболее часто используемые векторы экспрессии – это плазмиды или вирусы. Какой выбрать вектор экспрессии, зависит от системы экспрессии и множества других факторов.  Подходящий вектор экспрессии усиливает успешную экспрессию белка-мишени и, если это необходимо, очистку белка.  

Выбирая вектор экспрессии, примите во внимание следующие моменты:

Система экспрессии

Необходимо выбрать вектор, соответствующий системе экспрессии  (такой, как дрожжи, E. coli, клетки млекопитающих, насекомых, etc.).

Перед выбором вектора необходимо выбрать систему экспрессии для интересующего протеина.  

Expression system

Pic. 1 Показан вектор экспрессии pET22b-JT, использующийся в системе экспрессии E. Coli 

Pic. 2 Показан вектор экспрессии pPic9k-JT использующийся в системе экспрессии E. Coli 

 

Метка очистки 

Если вы хотите очистить белок после экспрессии, вектор экспрессии может содержать метки экспрессии, такие как  His, Myc, FLAG, etc. В дополнение, присутствие  C-terminal или N-terminal зависит от специфических условий эксперимента.

Использование белка

Векторы экспрессии могут содержать другие метки и химерные последовательности, в соответствии с целями последующего использования белка-мишени.   Если необходимо лучше понять функцию белка-мишени, метки и другие последовательности – полезный инструмент, позволяющие в дальнейшем проводить вестерн блот, иммунопреципитацию и другие эксперименты.

Сила промотора

В некоторых случаях необходим сильный промотор, в других – нормальный промотор.  Например, в дрожжах  TEF1 -  сильный структурный промотор, ADH1 структурный промотор средней силы, STE1   - слабый структурный промотор. Идеальный промотор достаточно силен для высокого  накопления продукта внутри клетки-хозяина и может минимизировать такие нежелательные эффекты на рост клетки, как токсичность.

Выбранный маркер

Выбираемый маркер  - это ген, сообщающий  свойство, «пригодное» клетке-хозяину.  Опция выбираемого маркера зависит от того, какая клетка-хозяин используется. Например, бета-лактамаза сообщает бактериальным клеткам-хозяевам резистентность к ампициллину.

Размер вектора

Здесь мы коснемся вопроса – с каким фрагментом ДНК – большим или маленьким – вы будете работать.  Векторы должны быть небольшими молекулами для удобства их использования.  Слишком большие векторы могут повлиять на репликацию и обусловить проблемы со стабильностью.   Обычно плазмиды  имеют последовательность до  15 kb. Но есть некоторые специальные плазмиды, которые содержат бОльшие последовательности. 

Главная цель любой системы экспрессии – продукция рекомбинантного белка высокого качества и в достаточном количестве.  Вектор экспрессии помогает «представить» инородный генетический материал клетке-хозяину, запускает экспрессию гена-мишени в клетке-хозяине и производит очищение белка-мишени. Поэтому выбор подходящего вектора экспрессии так важен.   

Вектор экспрессии системы экспрессии E.coli

В настоящее время доступно множество систем экспрессии белков, такие, как E. coli, дрожии, клетки насекомых, клетки млекопитающих. Соответственно, доступны различные векторы экспрессии, которые могут быть использованы в различных системах экспрессии.  Компания Кусабио предлагает некоторые векторы экспрессии E. coli по выгодной цене:

 

Expression Vector of E.coli Expression System

Cat No

Product Name

Size

Lead time

Expression system

Resistance

Tag

Protocol

CSB-PL200030

pET-21a(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200031

pET-21b(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200033

pET-22b(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200529

pET-23b(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200045

pET-30a(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Kanamycin

N-terminal 6xHis-tagged and C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200048

pET-32a(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

N-terminal 6xHis-Trx-tagged and C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200049

pET-32b(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

N-terminal 6xHis-Trx-tagged and C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200097

pGEX-6P-1 Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

N-terminal GST-tagged

Instructions

CSB-PL200093

pGEX-4T-1 Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

N-terminal GST-tagged

Instructions

CSB-PL200094

pGEX-4T-2 Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Ampicillin

N-terminal GST-tagged

Instructions

CSB-PL200038

pET-26b(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Kanamycin

C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

CSB-PL200040

pET-28a(+) Vector

10 μg plasmid

3-5 working days

E. coli Expression vector

Kanamycin

N-terminal 6xHis-tagged and C-terminal 6xHis-tagged

Instructions

Application: They are the expression vectors of E.coli expression system, you can subclone the synthesized gene to this vector and finish the expression vector construction, which can be used for subsequent protein expression.

 

Все вопросы по продукции Cusabio вы можете направить на электронную почту info@ld.ru

   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72