ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Микробиология  
  Идентификация микроорганизмов
  · GEN III OmniLog
  · GEN III MicroStation
  Определение чувствительности
  к антибиотикам
  · Анализатор BIOMIC V3
  · Анализатор TRINITY V3
  Системы для микробиологического
  анализа DuPont
  · Анализатор BAX Q7
  · Lateral Flow System
  · · Система E. Coli O157
  · · Система Listeria
  · · Система Salmonella
  Микробиологические инкубаторы
  · Инкубаторы Heraeus
  · Биореакторы RTS-1
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Стволовые клетки (Stem Cells)
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 
/ Каталог / Микробиология

Окрашивание микробных клеток

Важнейшее преимущество технологии Chemunex - учет только жизнеспособных клеток независимо от их физиологического статуса и стадии клеточного цикла (учитываются вегетативные клетки, споры, покоящиеся и супрессированные), так как:

  1. флюорохромы Chemunex приобретают способность к флюоресценции только под действием эндоферментов клетки
  2. накопление данных флюорохромов в клетке возможно только при условии целостности клеточной мембраны

Получаемые результаты наилучшим образом совпадают с результатами чашечного посева.

Варианты окрашивания клеток

Неспецифическое

Окрашиваются все жизнеспособные микробные клетки. Окрашивание обеспечивают: эндоферменты, универсальные для всех микроорганизмов.

Специфическое

Окрашиваются определённые жизнеспособные микробные клетки окрашивание обеспечивают:

  • специфические эндоферменты
  • специфические ДНК-последовательности
  • специфические антитела

Ключевыми этапами выявления и учёта микроорганизмов с использованием флюоресцентных красителей являются окрашивание ими микробных клеток в образце (или мечение) и дальнейшая детекция флюоресцирующих клеток и их подсчёт.

Мечение клеток происходит следующим образом. Первоначально нефлюоресцирующий краситель проникает внутрь клетки, и там под действием клеточных эндоферментов (при условии, что эти ферменты не повреждены, то есть химически активны) переходит во флюоресцирующую форму. В случае, если мембрана клетки сохранила целостность, флюоресцирующая форма красителя накапливается внутри клетки, в результате чего вся клетка обретает способность к флюоресценции. В противном случае флюоресцирующее вещество вытекает из клетки, растворяясь в общем объёме пробы.

Таким образом, условиями успешного флюоресцентного окрашивания являются наличие у клетки активных ферментов и целостной мембраны. Эти же факторы в первую очередь отвечают за жизнеспособность клетки. Применение такого способа окрашивания обеспечивает хорошую сходимость результатов цитометрии от AES Chemunex с данными, полученными традиционными методами. Кроме того, добавление особых "активаторов" ("viability substrates") позволяет эффективно прокрашивать не только метаболически активные, но и покоящиеся клетки. (Подобного результата в технологии мечения клеток и сходимости с данными посевов не достиг ни один из альтернативных производителей флюоцитометров.)

В основе прокрашивания всех без исключения жизнеспособных микробов в образце лежит использование ферментативной реакции, универсальной для всех микроорганизмов. Но наряду с этим существует возможность высокоселективного мечения, в результате которого способность к флюоресенции будут приобретать только микроорганизмы, принадлежащие к какой-либо определённой группе. Такая специфичность обеспечивается либо за счёт особых эндоферментов, присущих только целевой группе микробов, либо за счёт использования специфических для выявляемого микроорганизма последовательностей ДНК, либо антител к клеточной стенке или другим молекулярным структурам.

Примеры окрашивания для разных приложений

Целевой организм:

Все жизнеспособные микроорганизмы (Total Viable Count, TVC)

Плесени и дрожжи

Salmonella spp.

Enterobacteria
Способ мечения:
ферментативный ферментативный иммунный ферментативный после селективного обогащения
Специфичность окрашивания:
универсальное для жизнеспособных микроорганизмов специфическое для жизнеспособных клеток грибов специфическое специфическое для жизнеспособных энтеробактерий
   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72