ООО «Лабораторная Диагностика»
ООО «Лабораторная Диагностика»  
 Главная   Новости   О компании  Каталог продукции и цены   Оформить заказ   Контакты 
 
  
Каталог продукции
  Клеточные технологии и
  Стволовые клетки (Stem Cells)  
  Общая информация
  Выделение стволовых клеток:
  · Сортер клеток MoFlo  
  · Опыт применения  
  Тестирование стволовых клеток:
  · Бак. Анализ на стерильность  
  · Вирусная и бактериальная диагностика  
  · HLA - генотипирование  
  · Проточная цитометрия  
  · Типирование эритроцитов пуповинной     крови (cord blood) 
  · Флуоресцентная микроскопия  
  Реагенты для культивирования,   анализа и дифференцировки   стволовых клеток:
  · Производства Dako  
  · Рекомбинантные белки (Prospec) 
  Оборудование для культивирования   стволовых клеток:
  · Роботизированный комплекс HAMILTON 
  · Innovatis Cellscreen 
  Гематология  
  Гемостаз  
  Иммуногематология  
  Иммуногистохимия
  Иммуноферментный анализ (ИФА)
  Иммунохимия  
  Клеточные технологии  
  Клиническая биохимия
  Коагулометрия  
  Микробиология  
  Мультиплексный анализ  
  Оборудование для биохимии и
  молекулярной биологии
  Общелабораторное оборудование
  Онкология  
  Пищевая промышленность  
  Программное обеспечение  
  Проточная цитометрия
  ПЦР-лаборатория
  Рекомбинантные белки
  Репродуктивные технологии
  Сортировка клеток
  Спектрофотометрия  
  Трансплантология
  Цитогенетическая диагностика
  Экспресс-лаборатория  

 

Сортировка стволовых клеток

Использование сортера MoFlo

Введение

основная клеточная популяция

Очищенные популяции стволовых клеток представляют большой интерес для медико-биологического сообщества в двух аспектах - фундаментальном (исследование биологии стволовых клеток) и прикладном (клиническая трансплантация). В настоящее время продолжаются исследования гематопоэтических и негематопоэтических стволовых клеток с целью уточнения маркеров поверхности, функциональных характеристик и способности приживляться в организме реципиента in vivo. Ранее получение плюрипотентных клеток в лабораторных условиях представляло собой весьма сложную задачу. Например, при выделении периферических стволовых клеток для трансплантации из крови стимулированного донора их количество составляет от 0.01% до 1% лейкоцитов; содержание в костном мозге несколько выше - 0.5-5%. Для очистки этих клеток было разработано несколько подходов, в том числе высокоэффективная сортировка на основе мультипараметрического иммунофенотипирования или иммунофенотипирование в сочетании с функциональными тестами. Высокопроизводительный сортер клеток MoFlo оказался неоценимым помощником в этой работе. Эксперименты, описанные ниже, показывают, как MoFlo позволяет очистить минорную популяцию клеток костного мозга.

Материал и методы

минорная популяция клеток-предшественников

Окраска. Костный мозг из большеберцовой и бедренной костей мышей (линия C57BL/6, возраст 5-8 недель) помещают в полипропиленовые центрифужные пробирки и заливают раствором Хэнкса (HBSS+). Подсчитывают число ядросодержащих клеток в полученной суспензии, затем осаждают клетки и ресуспендируют в подогретой минимальной среде Дульбекко (DMEM+) в концентрации 106/мл. Добавляют краситель Hoechst 33342 (Sigma) до конечной концентрации 5 мкг/мл. Суспензию хорошо перемешивают и оставляют на 90 мин в водяной бане при постоянной температуре 37°С. Сразу по завершении инкубации пробирки переносят в охлажденную (4°С) центрифугу, осаждают, ресуспендируют в охлажденном HBSS+ и далее хранят при 4°С. Если перед исследователем стоит задача пометить поверхность клеток антителами, суспензию следует хранить при 4°С. При желании на этом этапе можно добавить в суспензию пропидий йодид (2 мкг/мл) для исключения из сортировки нежизнеспособных клеток.

Настройка прибора. Используется ультрафиолетовый лазер (351 нм). Эмиссию флуоресценции детектируют в синем и красном диапазоне (используя фильтры 450/20 и 650 eFLP соответственно).

Проточная цитометрия. Окрашеные клетки загружаются в MoFlo. При помощи программного обеспечения Summit, по отношению прямого и бокового рассеяния идентифицируется основная клеточная популяция (Рис. 1). Затем по отношению синей и красной флуоресценции красителя Hoechst 33342 идентифицируется минорная популяция клеток-предшественников (Рис. 2).

Обсуждение результатов

Использование MoFlo превратило очистку популяций гематопоэтических и негематопоэтических стволовых клеток (в том числе - минорных) в рутинную процедуру. Новые решения (электороника, оптика и гидравлика), реализованные в конструкции MoFlo, обеспечивают мощность и точность, необходимые для работы с редкими событиями, и позволяют получить искомые субпопуляции с высоким выходом. Кроме того, запатентованная конфигурация наконечников, использованных в MoFlo, уменьшает турбулентность и минимизирует отрицательные воздействия ускорения на клетки. В результате очищенные клетки полностью сохраняют функциональные свойства, что делает возможным их приживление in vivo, в том числе после трансплантации, и долгосрочное культивирование.

   
© ООО «Лабораторная Диагностика»,  info@LD.ru
телефоны: +7 (495) 461-67-60, +7 (499) 348-25-72